Differbetween
Mentre sia le membrane di nitrocellulosa che quelle di PVDF vengono utilizzate per il Western blotting e l'analisi degli amminoacidi, la nitrocellulosa è ideale per rilevare proteine a basso peso molecolare mentre il PVDF è più adatto per rilevare proteine a peso molecolare più elevato.
- Cos'è una membrana di nitrocellulosa?
- Cos'è una membrana in PVDF?
- Come si usa la membrana di nitrocellulosa?
- Le proteine possono passare attraverso la membrana in PVDF?
- Quali sono i vantaggi e gli svantaggi delle membrane in PVDF e nitrocellulosa?
- A cosa serve la nitrocellulosa?
- Come si conservano le membrane in PVDF?
- Che cosa significa PVDF?
- Come viene applicato il rivestimento in PVDF?
- Qual è la dimensione dei pori della nitrocellulosa?
- Perché immergi la membrana PVDF nel metanolo?
- Perché è stato necessario per il trasferimento alla membrana PVDF?
Cos'è una membrana di nitrocellulosa?
Le membrane di nitrocellulosa sono una matrice popolare utilizzata nel blotting delle proteine a causa della loro elevata affinità di legame alle proteine, compatibilità con una varietà di metodi di rilevamento (chemiluminescenza, cromogeni e fluorescenza) e la capacità di immobilizzare proteine, glicoproteine o acidi nucleici.
Cos'è una membrana in PVDF?
Le membrane di polivinilidene fluoruro (PVDF) legano le biomolecole attraverso interazioni idrofobiche. I pori della membrana aumentano l'area di legame superficiale limitando le dimensioni delle proteine legate. ... Ha una maggiore capacità di legare le proteine e una ritenzione maggiore rispetto alle membrane da 0,45 µm.
Come si usa la membrana di nitrocellulosa?
Nitrocellulosa — Posizionare la membrana direttamente in un piatto poco profondo contenente 50 ml di 1X Transfer Buffer per diversi minuti. Carta da filtro: immergere brevemente la carta da filtro in 1X Transfer Buffer immediatamente prima dell'uso. Gel: utilizzare il gel immediatamente dopo la corsa.
Le proteine possono passare attraverso la membrana in PVDF?
50-60% in quanto possono effettivamente passare la membrana di trasferimento e perdersi. Per proteine più grandi dovresti diminuire la percentuale del tuo gel per aumentare la mobilità delle proteine. ... Puoi anche eseguire un semplice test di insufflazione proteica posizionando una seconda membrana dietro la tua membrana primaria.
Quali sono i vantaggi e gli svantaggi delle membrane in PVDF e nitrocellulosa?
Il PVDF ha una capacità di legare le proteine da 170 a 200 μg / cm2 mentre la nitrocellulosa ha una capacità di legare le proteine da 80 a 100 μg / cm2. Poiché il PVDF ha una maggiore capacità di legare le proteine, offre anche una maggiore sensibilità.
A cosa serve la nitrocellulosa?
Guncotton, o nitrocellulosa (nota anche come trinitrocellulosa e nitrato di cellulosa) è un blando esplosivo, utilizzato in razzi, propellenti, basi per inchiostri da stampa, finiture in pelle e celluloide (una miscela di nitrocellulosa e canfora; utilizzata per la prima volta per la fabbricazione di palle da biliardo).
Come si conservano le membrane in PVDF?
Per conservare le membrane in PVDF per lungo tempo, devono essere impilate in materiale non biodegradabile con una temperatura di ~ 4 ° C. Vale la pena ricordare che le membrane devono essere completamente asciugate prima di essere immagazzinate.
Che cosa significa PVDF?
PVDF è l'abbreviazione di polivinilidene fluoruro, che può anche essere indicato come PVF2. Questo polimero fa parte di una classe di materiali noti come fluorocarburi o fluoropolimeri, che sono caratterizzati da un'elevata stabilità termica e un'eccellente resistenza chimica.
Come viene applicato il rivestimento in PVDF?
Il rivestimento a spruzzo PVDF utilizza una pompa a membrana o una pompa a pistone per applicare la pressione e l'elettricità statica per la spruzzatura. Il rivestimento in polvere viene spruzzato agitando o inalando e la polvere elettrostatica viene spruzzata sulla bocca della pistola. L'essiccazione del PVDF può essere sia un'essiccazione livellante naturale che una cottura al forno.
Qual è la dimensione dei pori della nitrocellulosa?
La membrana di nitrocellulosa di dimensione dei pori di 0,2 µm di Bio-Rad è densa nitrocellulosa al 100%. La nitrocellulosa pura è la membrana più utilizzata per il trasferimento di proteine e acidi nucleici.
Perché immergi la membrana PVDF nel metanolo?
Un breve risciacquo (15-30 secondi) in metanolo (o altro alcool al 100% (etanolo o isopropanolo)) prima del trasferimento Western "idraterà" la membrana e consentirà un migliore trasferimento e legame proteico. Le membrane di nitrocellulosa sono idrofile, quindi possono essere completamente idratate da tamponi acquosi.
Perché è stato necessario per il trasferimento alla membrana PVDF?
Dopo che l'elettroforesi è completa, le proteine devono essere trasferite dal gel su una membrana adatta per la colorazione e il rilevamento degli anticorpi. Il PVDF è generalmente migliore per le proteine a basso peso molecolare. ... Questa membrana può essere acquistata in diverse dimensioni dei pori.
