protocollo di citometria

Protocollo di colorazione tramite citometria a flusso (FACS) (colorazione della superficie cellulare)

• Raccogliere, lavare le cellule (sospensione monocellulare) e regolare il numero di cellule a una concentrazione di 1-5x106 cellule / ml in tampone FACS ghiacciato (PBS, 0,5-1% BSA o 5-10% FBS, 0,1% NaN3 sodio azide * ). ...
• Aggiungere 100 ml di sospensione cellulare a ciascuna provetta.

1. A cosa serve la citometria a flusso?
2. Qual è il principio della citometria a flusso?
3. Cosa può misurare la citometria a flusso?
4. Come si colorano le cellule per la citometria a flusso?
5. La citometria a flusso può rilevare le cellule morte?
6. La citometria a flusso può rilevare la leucemia?
7. Perché la luce laser viene utilizzata nella citometria a flusso?
8. Come viene utilizzata la citometria a flusso in ematologia?
9. Come si rappresentano i dati della citometria a flusso?
10. La citometria a flusso può rilevare il linfoma?
11. Quanto tempo richiedono i risultati della citometria a flusso?
12. Come si compensa la citometria a flusso?

A cosa serve la citometria a flusso?

La citometria a flusso è un metodo di laboratorio utilizzato per rilevare, identificare e contare cellule specifiche. Questo metodo può anche identificare particolari componenti all'interno delle cellule. Queste informazioni si basano su caratteristiche fisiche e / o marcatori chiamati antigeni sulla superficie cellulare o all'interno di cellule che sono univoci per quel tipo di cellula.

Qual è il principio della citometria a flusso?

Il principio di base della citometria a flusso è il passaggio di cellule in un unico file davanti a un laser in modo che possano essere rilevate, contate e ordinate. I componenti delle cellule vengono etichettati in modo fluorescente e quindi eccitati dal laser per emettere luce a lunghezze d'onda variabili.

Cosa può misurare la citometria a flusso?

La citometria, nella sua forma più pura, è la misurazione delle caratteristiche delle cellule, che possono includere le dimensioni delle cellule, il numero di cellule, il ciclo cellulare e altro ancora. Questa tecnica consente ai ricercatori di ottenere informazioni altamente specifiche sulle singole cellule.

Come si colorano le cellule per la citometria a flusso?

Diluire il reagente secondario marcato con fluorocromo appropriato in 100 µl di tampone di colorazione per citometria a flusso e aggiungerlo alle cellule. Incubare per almeno 30 minuti a 2-8 ° C o su ghiaccio. Proteggi dalla luce. Lavare le cellule aggiungendo il tampone di colorazione per citometria a flusso.

La citometria a flusso può rilevare le cellule morte?

La perdita dell'integrità della membrana è un indicatore definitivo della morte cellulare nei test citometrici a flusso. Le cellule che escludono un colorante cellulare morto sono considerate vitali, mentre le cellule con una membrana compromessa consentono al colorante all'interno della cellula di colorare un componente interno, identificando così la cellula come morta.

La citometria a flusso può rilevare la leucemia?

L'immunofenotipizzazione mediante citometria a flusso può essere eseguita su sangue, midollo osseo o altri campioni per fornire queste informazioni aggiuntive. È in grado di rilevare cellule normali e cellule anormali il cui modello di marcatori è tipicamente visto con tipi specifici di leucemia e linfoma.

Perché la luce laser viene utilizzata nella citometria a flusso?

I laser vengono utilizzati nella citometria a flusso come fonte di eccitazione di campioni cellulari marcati con fluoroforo. Spesso sono necessari più colori laser per caratterizzare più proprietà cellulari.

Come viene utilizzata la citometria a flusso in ematologia?

La citometria a flusso è stata utilizzata per identificare e fenotipizzare accuratamente i globuli rossi del ricevente (44). La citometria a flusso viene utilizzata sempre più nella banca del sangue per valutare la contaminazione leucocitaria negli emoderivati ​​a ridotto numero di leucociti (45) (46).

Come si rappresentano i dati della citometria a flusso?

I dati della citometria a flusso sono tipicamente rappresentati in due modi: istogrammi, che misurano o confrontano solo un singolo parametro, e diagrammi a punti che confrontano 2 o 3 parametri simultaneamente su un diagramma a dispersione bidimensionale o tridimensionale.

La citometria a flusso può rilevare il linfoma?

La citometria a flusso può diagnosticare il linfoma di Hodgkin classico nei linfonodi con sensibilità e specificità elevate.

Quanto tempo richiedono i risultati della citometria a flusso?

Questi modelli vengono confrontati con i modelli normali per determinare il significato dei risultati. Il test dura circa tre ore e consiste nel colorare le cellule, acquisire le cellule su un citometro a flusso e quindi far analizzare da un tecnico esperto i risultati che sono stati salvati su un file di computer.

Come si compensa la citometria a flusso?

Come compensare correttamente un esperimento di citometria a flusso a 4 colori

1. 4 passaggi per compensare un esperimento a 4 colori. ...
2. Scegli il corriere corretto per il risarcimento. ...
3. Passaggio 2: raccogli i dati e assicurati che ci sia un numero sufficiente di eventi. ...
4. Calcola correttamente la compensazione. ...
5. Applicare i valori di compensazione e controllare i risultati.